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愛必夢生物科技有限公司

重大新聞

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    跑一張漂亮的WB膠圖?so easy!


    Western Blot

    對于任何一個科研君都不陌生

    But

    為什么別人的實驗

    時間短

    跑膠快

    成像顯影辣么好看

    活生生的羨慕,嫉妒,哼o( ̄ヘ ̄o#)

    內情你知否?

    除了實驗精細化操作

    選擇合適最佳的實驗試劑

    還有呢?

    當然是

    你的人品!

    呃呃

    手誤


    蛋白印跡(WB

    蛋白印跡也稱作免疫印跡,是一種被廣泛應用并得到公認的技術,用于檢測細胞或組織提取物中的蛋白表達水平。

    這一技術利用抗體與特定待檢測蛋白的結合,測定生物樣本中的蛋白水平??贵w與其靶點蛋白表位的精確結合可用于檢測蛋白質中具有高度特異性的氨基酸序列。一句話講完WB:就是抗原抗體反應!

    WB操作關鍵步驟

    ?

    跑膠與轉膜的好壞關系到Western blot最終結果的好壞,小愛今天主要講的是跑膠與轉膜,供大家參考

    跑膠

    加入足量的樣品和分子量大小標記物

    SDS-PAGE 根據蛋白電泳遷移率將其分離,我們建議在預制 Tris-Glycine 小孔膠上樣20-40μg 全細胞裂解液或100ng純化蛋白,根據目標蛋白的表達量優化上樣量。應在待測樣本附近的泳道加入分子量標記物,作為參考點。分子量標記物(或梯狀條帶)是已知分子量的純化蛋白的混合物。

    蛋白分子量標準,常稱之為蛋白Marker。在免疫印跡(Western blot)試驗中,分子量Marker雖不起眼,但意義重大,是陽性對照,是大小的標準,是必須的。只有Marker精確無誤了,實驗結果才有說服力。除此之外,蛋白Marker還能夠提示電泳是否正常,轉移是否成功等信息,abm公司的多色預染蛋白Opti-Protein Marker具有大小準確,對比鮮明的特點,其預染色標記可以看見電泳過程中蛋白遷移的距離。

    Opti-Protein Marker應用:

    • 實時監控SDA-PAGE中的蛋白遷移

    • 檢驗western轉膜效率

    • 對蛋白大小進行初略鑒定

    • 呈彩色且轉膜效果好

    (蛋白Marker可以申請免費試用裝,請點擊“閱讀原文”,進入申請頁面,提供貨號最好哦。

    轉膜


    1.濕轉移

    把蛋白從凝膠轉移至膜上的濕轉移是指把濾紙-凝膠-膜-濾紙“三明治”完全浸入緩沖液中。使用此方法時,在浸沒的情況下通過電泳轉移至 0.2 μm 孔徑硝酸纖維素膜,在冷卻的含 20% 甲醇的轉移緩沖液中轉膜。


    2.半干轉移

    把蛋白從凝膠轉移至膜上的半干轉移是指將浸滿緩沖液的濾紙-凝膠-膜-濾紙“三明治”系統,置于本應干燥的陽極和陰極板上。在這一系統中,轉移在桌面上進行,在室溫條件下約15-60分鐘。轉移低分子量和高分子量蛋白時這一系統均運轉良好,相較于濕轉移所需緩沖液更少,但是在某些情況下會產生更高的背景染色。(轉膜時不離人,監測電流電壓)


    3.干轉移

    把蛋白從凝膠轉移至膜的干轉移是指不額外加入緩沖液的系統,因為陽極和陰極板系統中含有緩沖液基質。對于較大分子量蛋白,觀察到信號差異最大,表明轉移效率低。

    (注意:在樣本量有限或待檢測蛋白低內源水平的情況下,干轉移方法會限制您分析的靈敏度。)


    abm的的Opti-Protein Marker可以隨著電轉移至膜上,由于其預染色的特點,可以用作轉膜是否成功的標記,是不是很膩害?

    不同的固相載體對于Western blot結果也有一定的影響,大家對膜的選擇可以參考下圖。

    同時abm也提供大量WB,IHC,IP,IF等實驗中所需要的各種抗體:

    我們的內參好到什么地步呢?看看幾張客戶的返圖吧:

    說好的1:1000稀釋比,這位客戶!您竟然稀釋到了1:2000去用!

    還好我們abm的產品經受住了考驗~


    這位客戶就更厲害啦,1:5000的稀釋比?沒事,我們也沒在怕~

    友情提示:由于大量稀釋后的抗體會很考驗使用者的手法和經驗,所以1:2000小愛覺得對我們普通人還ok,1:5000就請大神級別的人物再去嘗試啦。

    另外,我們的性價比高于Proteintech這種事,我才不會輕易說呢~


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