【CRISPR干貨】體外sgRNA靶點效率檢測到底怎么做？
【CRISPR干貨】體外sgRNA靶點效率檢測到底怎么做？
十多年前，當研究人員開始解析細菌和古細菌中一個稱為 CRISPR 結構的時候，他們并沒有預料到這會給基因編輯世界帶來一場風暴。 在過去的幾年時間里，CRISPR已經迅速席卷了整個生物王國，成為了DNA突變和編輯的一種熱門技術，迄今為止，CRISPR方法幾乎在每種實驗細胞中均能起作用，包括人類細胞，小鼠，大鼠和斑馬魚等細胞。
CRISPR的質粒和病毒大家很常見了，abm公司除了提供高質量的CRISPR質粒和病毒之外，也提供成熟的sgRNA靶點篩選試劑盒（G953），大家也許會問，此試劑盒如何使用呢？ sgRNA靶點篩選試劑盒（G953）可用于在體外快速檢測CRISPR中sgRNA靶點效率，以此尋找到敲除效果最好的那個靶點。 接下來小愛給您簡述一下如何使用試劑盒進行CRISPR靶點篩選實驗，原理如下圖，Cas9蛋白可在sgRNA的引導下對雙鏈DNA進行酶切。
abm公司合成的高質量sgRNA（目標DNA上設計3個sgRNA） abm公司合成的DNA模板擴增引物 sgRNA靶點篩選試劑盒（G953） 1. 裂解細胞獲得細胞裂解液 2. 細胞裂解液立刻進行下游實驗，或儲存在-20℃。 3. PCR擴增敲除的DNA模板,反應體系如下： 4. 擴增程序如下： 5. 用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物純度。 1. 設置如下反應體系： 2. 37℃孵育30分鐘，然后分別加入2ul的Protein Degrader在37℃孵育10分鐘以降解Cas9蛋白等，更方便下游的瓊脂糖凝膠電泳檢測分析。 3. 瓊脂糖凝膠電泳檢測不同靶點的敲除效率，其中陽性對照敲除之后會有1.5kb和0.6kb的兩條帶。 如下圖所示，可以得到在此次設計的3個靶點中，靶點3的效果最好，靶點2的效果次之，靶點1的效果最差。
CRIPSR/Cas9系統不同的sgRNA的切割效率有著比較明顯的差異， sgRNA靶點篩選試劑盒（G953）用于快速檢測CRISPR靶點敲除效率， 可以在進行耗時費力的 基因敲除細胞系構建或者基因敲除動物等實驗之前， 對CRISPR靶點進行驗證。 abm公司也提供CRISPR靶點設計以及高質量的sgRNA合成服務， 結合我們的全面優質的CRISPR相關試劑， 可以為科研工作者提供全面系統的幫助。 下面給大家看幾個abm的CRISPR產品的應用實例： 案例一 新加坡的研究學者們使用abm的CRISPR慢病毒質粒進行研究， 其結果發表在Nature子刊，影響因子12分的《Nature communications》上。 更多細節，請您撥打我們技術支持的電話0511-83367989轉602， 或添加技術老師的QQ，進行咨詢， 也可以點擊“閱讀原文”直接找到對應銷售工程師，進行訂購：
